產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介：

ZLyticase，中文名細胞壁溶解酶，溶壁酶，能水解聚β(1→3)-葡萄糖（poly-β(1→3)-glucose）比如酵母細胞壁葡聚糖。酵母細胞很難破壞，因為細胞壁可能形成莢膜或耐性孢子。通過使用裂解酶比如溶壁酶（lyticase）、幾丁質(zhì)酶（chitinase）、細胞壁溶解酶（zymolyase）和葡聚糖酶（gluculase）誘導(dǎo)部分原生質(zhì)球形成，然后接下來酵母細胞被裂解釋放DNA。溶壁酶（lyticase）更適合用于消化酵母細胞壁和產(chǎn)生轉(zhuǎn)化用真菌來源的原生質(zhì)球。

本品以凍干粉形式提供，酶比活力為20,000 units/g，易溶于水，適用于原生質(zhì)體/原生質(zhì)球制備、酵母細胞融合、酵母細胞轉(zhuǎn)化和酵母遺傳學(xué)研究。

產(chǎn)品屬性

CAS NO：37340-57-1

同義名： Lyticase;酵母細胞壁溶解酶；酵母細胞壁溶解酵素；溶壁酶；

來源：藤黃節(jié)桿菌（Arthrobacter luteus）

外觀：凍干粉

比活力：≥200 units/mg solid

單位定義：3ml反應(yīng)混合液中以酵母細胞懸液為底物，于25℃，pH 7.5條件下，每分鐘使得ΔA800發(fā)生0.001變化所用的酶量即為一個酶活力單位（unit）。

溶解性：易溶于水

作用譜：報道顯示lyticase有效溶解以下前株包括 Ashbva, Candida, Debarvomyces, Eremothecium, Endomvces, Hansenula, Hanseiaspora. Kloeckera. Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia,Pichia,Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomycesspecies.

酶活力測定方法

1.實驗試劑制備

1.1 超純水(≥18 MΩxcm resistivity at 25℃)

1.2 磷酸緩沖液(67mM磷酸鉀緩沖液，pH 7.5，25℃):用超純水配制9.1mg/ml磷酸二氫鉀溶液，用1M KOH調(diào)整pH至7.5(25°C)

1.3 底物(0.4% w/v啤酒酵母(釀酒酵母)懸浮液)

a)使用研缽和研杵研磨適量酵母菌以得到超過800mg的酵母粉。研細的粉未粒徑需在25-35網(wǎng)目尺寸。

b)用超純水加入酵母粉制備4mg/mI醇母溶液。

c)室溫條件300rpm攪拌酵母溶液～2h?！咀⒁狻?更高速度攪拌會引起酵母細胞的過早裂解;

d)2h后停止攪拌，使得更大沉淀靜置下去。小心吸取上方2/3的是浮液到一個新的燒杯內(nèi)。去除更大沉淀能夠在進行分光光度計讀數(shù)時，降低信噪比。

e)進行實驗前需要確定底物濃度。測定酵母混合液和超純水的A800，吸光度比值在0.6-1.0之間，如有必要，通過改變酵母粉量或超純水來調(diào)整吸光度比值

f)室溫條件300rpm混勻底物，能穩(wěn)定保存高達8h，

1.4 酶溶液

使用前，用冰超純水配置500 units/ml溶壁酶溶液?！咀⒁?:對一些粗制酶(lyticase)可能需要超過15min使其溶解。短時間超聲1-15s能夠促進酶溶解，但不會影響酶活性。

2. 反應(yīng)程序

3ml反應(yīng)體系中，各組分最終濃度是34mM 磷酸鉀，～0.12%（w/v）啤酒酵母，25-35 units 溶壁酶

2.1 按下表吸取各組溶液到5ml 離心管內(nèi)，

2.2 顛倒混合上述各管溶液，并于25℃平衡5分鐘。然后加入酶溶液。

2.3 立即顛倒混勻上述各管溶液，記錄下～10min后下降后的A₈₀₀。非常重要的是要即刻混勻所有比色皿試劑，并依此測定各管A₈₀₀.

2.4 以2min為檢測時間段，記錄下每個測試組的最大線性比率△A800/min，每個測試組的最大線性比率需要用空白組來校正。校正后的△A800/min應(yīng)在0.025-0.035范圍內(nèi)，才能保證后續(xù)結(jié)果的可靠性。如果不在此范圍內(nèi)，可通過調(diào)整適當酶溶液并重復(fù)讀數(shù)。

3. 測定結(jié)果

保存與運輸方法

-20℃干燥保存，至少1年有效。冰袋運輸。

注意事項

1、本品易溶于水，有文獻報道按照1900 units/0.2ml PBS配置儲存液；也有文獻溶于20mM磷酸鈉緩沖液，pH 7.0配置20mg/ml儲存液，可根據(jù)自身需求來配置適宜濃度的儲存液，根據(jù)單次用量分裝凍存。

2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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