產(chǎn)品簡介

        miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（by stem-loop）是miRNA cDNA第一鏈合成的專用試劑盒(莖環(huán)法)。其中包含42℃, 2min的基因組DNA去除步驟，操作簡便，可快速消除基因組DNA的干擾。本產(chǎn)品包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶ToLoScript III RTase以及針對miRNA的基因組去除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)優(yōu)化的最適緩沖液，從而有利于miRNA特異性逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的生成。建議使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204)進行cDNA產(chǎn)物后續(xù)定量。

產(chǎn)品優(yōu)勢

? 優(yōu)異的線性關(guān)系：在一定的模板區(qū)間內(nèi)具有優(yōu)異線性關(guān)系，模板含量最低檢測限可低至pg級。
? 最適的反應(yīng)體系：含有針對新一代逆轉(zhuǎn)錄酶ToLoScript III RTase，以及miRNA的基因組去除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)優(yōu)化的最適緩沖液，更有利于miRNA特異性逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的生成。

 實驗案例

         以293T細胞的miRNA的10倍稀釋梯度（1μg~10 pg）為模板，使用Tolobio#22112以及Supplier A，按照各自說明書推薦程序進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，得到的cDNA使用2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix(Tolobio #22204)擴增hsa-miR-19a基因。實驗結(jié)果顯示，在一定的模板區(qū)間內(nèi)，本產(chǎn)品相比于同類產(chǎn)品具有優(yōu)異的線性關(guān)系。

實驗流程

1.基因組DNA去除
1.1去除gDNA反應(yīng)體系
室溫融化5 × miR gDNA Erase-Out Mix、10 × miR RT Buffer (stem)及ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) 后置于冰上，在RNase-free離心管中配制如下反應(yīng)體系：

用移液器吹打混勻后短暫離心。

1.2 去除gDNA反應(yīng)程序

2.第一鏈cDNA合成

2.1第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系

用移液器吹打混勻后短暫離心。

2.2第一鏈cDNA合成反應(yīng)程序

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接進行下游qPCR檢測。若短期內(nèi)不進行下游實驗，可-20℃保存。若需長期保存，建議分裝后保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

 產(chǎn)品組成

a.包含dNTP；
b.包含ToLoScript III RTase, RNase inhibitor。

 保存條件

       -20℃保存，≤ 0℃運輸；