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果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBP)檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0514 | 售價(jià)（元） | 2280 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0514 |
果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBP)檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測(cè)定意義：
果糖-1,6二磷酸酶又稱果糖1,6二磷酸酯酶，催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無(wú)機(jī)磷，在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用。
測(cè)定原理：
FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無(wú)機(jī)磷，在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測(cè)定NADPH增加速率，即可計(jì)算FBP活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0514-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑二：液體 |
7.2μl |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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試劑四：液體 |
25ml |
4℃ |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入20ml試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體7.2μl×1支，4℃保存；臨用前加入1ml蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1ml蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
自備儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理
①總FBP酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1ml提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘
3、 加樣表：
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試劑名稱(μl) |
測(cè)定管 |
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樣本 |
20 |
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試劑二 |
10 |
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試劑三 |
10 |
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試劑一 |
160 |
將上述試劑按順序加入微量石英比色皿或96孔板中，立即混勻，加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340 nm波長(zhǎng)下記錄反應(yīng)1min后吸光度A1和反應(yīng)6min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
FBP活性計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。