測(cè)定意義：

植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營(yíng)養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長(zhǎng)狀況的重要指標(biāo)。

測(cè)定原理：

葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可計(jì)算得葉綠素a和葉綠素b以及總?cè)~綠素含量。

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃試管、錫箔紙、丙酮。

測(cè)定操作：

1. 稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。

2. 提取液的準(zhǔn)備：取240ml蒸餾水和960ml丙酮，充分混勻待用。

3. 加入1ml蒸餾水，少量試劑一（約50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉(zhuǎn)入10ml玻璃試管。

4. 用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管，用提取液補(bǔ)充至10ml，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘?jiān)耆儼讋t提取完全，若組織殘?jiān)赐耆儼祝^續(xù)浸提至其完全變白。

5. 取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板，提取液調(diào)零，測(cè)定663nm和645nm處吸光值，分別記為A₆₆₃和A₆₄₅ 。

計(jì)算公式：

葉綠素a含量（mg/g 鮮重）=（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅）×D÷m

葉綠素b含量（mg/g 鮮重）=（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃）×D÷m

葉綠素總含量（mg/g 鮮重）=（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

                    = 0.01×（20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃）×D÷m

V提：提取液體積，10ml；D：稀釋倍數(shù)；m：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1. 葉綠素對(duì)光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進(jìn)行。

2. 一定要浸提至組織殘?jiān)耆儼?，否則提取不充分。

3. 用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質(zhì)被轉(zhuǎn)移至玻璃試管。

4. 測(cè)定時(shí)吸光值超過(guò)1，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。