測(cè)定意義：

鋅是必需的微量元素之一，在胰島素和卟啉代謝中也起重要作用。

測(cè)定原理：

在pH 8.5~9.5的溶液中，Zn²⁺與鋅試劑生成藍(lán)色配位化合物，在620nm有最大吸收峰。

組成：

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前1天配制，加入15ml無水乙醇充分溶解，蓋緊，過夜待用。4℃保存可穩(wěn)定約1個(gè)月，如顏色變黃，則已失效。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1支，10 μ mol/L Zn2+標(biāo)準(zhǔn)液。4℃保存。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和無水乙醇。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到620 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液解凍：提前取出標(biāo)準(zhǔn)液，置于室溫下充分解凍后混勻。

3. 空白管：取1.5 ml EP管，依次加入100 μl蒸餾水，100μl試劑一，混勻；室溫，13000g，離心10min，小心吸取上清液100 μl，加入0.5 ml EP管，加入100μl試劑二，100μl試劑三，充分混勻后13000g離心取上清，吸取200μl于微量石英比色皿/96孔板，620 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1.5 ml EP管，依次加入100 μl標(biāo)準(zhǔn)液，100 μl試劑一，混勻；室溫，13000g，離心10min，小心吸取上清液100 μl，加入0.5 ml EP管，加入100μl試劑二，100μl試劑三，充分混勻后13000g離心取上清，吸取200μl于微量石英比色皿/96孔板，620 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取1.5 ml EP管，依次加入100 μl血清，200 μl試劑一，混勻；室溫，8000g，離心10min，小心吸取上清液100 μl，加入0.5 ml EP管，加入100μl試劑二，100μl試劑三，充分混勻后13000g離心取上清，吸取200μl于微量石英比色皿/96孔板，620 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血鋅濃度計(jì)算公式：

血鋅濃度（μ mol/ L）=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

= 10×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：10 μ mol/L Zn²⁺

注意事項(xiàng)：

1. 試劑三需提前一天配制，如變黃色則不能再使用。

2. 加入試劑三混勻后，要在30 min內(nèi)完成該管測(cè)定。

3. 最低檢出限為1μ mol/L。