正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測(cè)定原理：

堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu²⁺還原成Cu⁺ ；2分子的BCA與Cu⁺ 結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰最強(qiáng)。

自備儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、移液器、1ml玻璃比色皿和蒸餾水。

組成：

工作液配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×1ml），將試劑A和B按照50:1的比例混合，蓋緊后充分混勻。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：

1、液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。

2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）:提取液體積（ml）為1:5～10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水

   冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。

3、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為500～1000:1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300W，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3分鐘）；然后8000g，4℃，離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到562nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30min.

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次

計(jì)算公式：

Cpr(mg/ml)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

          = 0.5×(A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

Cpr(mg/g)= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W

         = 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W

W:樣本質(zhì)量,g

注意事項(xiàng)：

BCA法蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒，適用于測(cè)定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測(cè)定前取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，若A測(cè)定管-A空白管>1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定，以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。