用于豬脾臟、淋巴結(jié)、肉品、血液及血液制品中豬藍(lán)耳病毒核酸的檢測。

用法與判定：

使用病毒 DNA/RNA 核酸提取試劑盒提取核酸，按照如下步驟操作：

熒光 PCR 反應(yīng)體系的配置：取出試劑盒中的各組分，置室溫（15-25℃）融化后瞬時(shí)離心，備用。每 次檢驗(yàn)設(shè)陰、陽性對照。設(shè)待檢樣品、陽性對照和陰性對照的樣品總份數(shù)為 n，按如下反應(yīng)體系配置：：

將以上配置的反應(yīng)體系充分混勻后，按 25ul/管分裝至反應(yīng)管中。分別取提取的核酸樣品 5ul 加入相

應(yīng)反應(yīng)管中，蓋緊管蓋后瞬時(shí)離心。

1.熒光 PCR 反應(yīng)條件：

對于 ABI 熒光 PCR 儀，選擇 FAM 通道讀取檢測結(jié)果，淬滅基團(tuán)選擇“MGB”；

對于其它品牌的熒光 PCR 儀，選擇 FAM 通道讀取檢測結(jié)果，淬滅基團(tuán)選擇“None” 本產(chǎn)品使用特殊的 ROX Reference Dye，適用于所用 qPCR 儀器，無需在不同的儀器上調(diào)整 ROX 的

濃度。

2.試驗(yàn)成立條件：陽性對照 Ct 值≤35 并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，陰性對照無 Ct 值或無典型的擴(kuò)增曲 線，則判為試驗(yàn)成立。

3.判定：待檢測樣品 Ct 值≤35 并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，判為陽性；待檢樣品無 Ct 值或 35＜Ct 值

≤40 并且無典型的擴(kuò)增曲線，判為陰性。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒應(yīng)在-20℃以下保存和運(yùn)輸。

2.本試劑盒僅用于科研檢測使用，操作人員必須經(jīng)過培訓(xùn)，試劑盒使用前請仔細(xì)閱讀說明書全文。

3.不要使用過期組分或者不同批次組分混合使用。

4.使用時(shí)盡量避免反復(fù)凍融，如凍融，應(yīng)不超過 3 次。

5.樣品采集和處理過程應(yīng)戴一次性手套，并及時(shí)更換，樣品間嚴(yán)禁交叉污染。

6.熒光 PCR 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格分區(qū)操作，各區(qū)應(yīng)有專用的手套、移液器等，不得交叉使用，避免污染；工作 人員應(yīng)遵循單方向工作原則，各工作區(qū)相對隔離。

7.進(jìn)行熒光 PCR 實(shí)驗(yàn)的工作桌面及相關(guān)物品應(yīng)定期用 1%次氯酸鈉、75%酒精、1mol/L 鹽酸依次滅菌 和消毒，或定期用紫外燈滅菌和消毒。