莫能菌素Monensin 細(xì)胞內(nèi)蛋白運(yùn)輸?shù)囊种苿?/strong>
流式胞內(nèi)染色中最常用的活化細(xì)胞方法就是用一定濃度的PMA和Ionomycin刺激細(xì)胞4-6小時(shí)，同時(shí)加入蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑（通常是monensin或brefeldin A）阻止高爾基體將新分泌蛋白運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞外，從而達(dá)到通過流式來檢測細(xì)胞因子的目的。
常見的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑：Monensin莫能霉素， CAS NO：22373-78-0
產(chǎn)品簡介：莫能菌素是細(xì)胞內(nèi)蛋白運(yùn)輸?shù)囊种苿?。莫能菌素在培養(yǎng)細(xì)胞中進(jìn)行孵育會導(dǎo)致蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體（GC）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）中的蛋白質(zhì)積聚。在細(xì)胞體外活化的最后幾個(gè)小時(shí)內(nèi)添加莫能菌素可增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測。莫能菌素可有效增強(qiáng)大多數(shù)小鼠和人類細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測；但是，建議研究人員在其特定的測定系統(tǒng)中評估該試劑以及其他蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑（例如布雷菲德菌素A）的用途和功效。
Brefeldin A（BFA，布雷非德菌素A）， CAS NO：20350-15-6
產(chǎn)品簡介：一種常用的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，特異性地可逆地阻斷蛋白質(zhì)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體（Golgi）。經(jīng)BFA處理，高爾基體很快被破壞并融合到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，該過程呈現(xiàn)能量、溫度和微管依賴性。BFA是一種真菌代謝物，最初曾用作抗病毒試劑，現(xiàn)主要用于研究蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)。BFA也常被用于抑制細(xì)胞因子等蛋白的分泌，并用于增強(qiáng)分泌蛋白的免疫染色檢測。BFA可激活神經(jīng)鞘磷脂循環(huán)（sphingomyelin cycle），還可誘導(dǎo)一些腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。
PMA 佛波肉豆蔻醋酸 CAS NO：16561-29-8
Phorbol 12-myristate 13-acetate( 佛波肉豆蔻醋酸) ，簡稱為PMA 也稱為TPA CAS NO 16561-29-8，一種廣泛用于體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的佛波酯(phorbol ester )類PKC激舌劑。PMA可抑制Fas誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，同時(shí)又可誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的周亡發(fā)生。PMA是一種強(qiáng)效的腫瘤促進(jìn)劑能夠誘導(dǎo)小鼠皮膚瘤生成。常常與離子霉素Ionomycin 聯(lián)合刺激多種免疫細(xì)胞，以產(chǎn)生細(xì)胞因子。同時(shí)也與蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑如布雷非德菌素A( Brefeldin A ,) ,莫能霉素( Monensin ) 聯(lián)合使用抑制細(xì)胞因子外分泌，保留在細(xì)胞內(nèi)以準(zhǔn)確分析細(xì)胞因子表達(dá)水平。
實(shí)驗(yàn)參考：
細(xì)胞因子
克隆號
靶向細(xì)胞
刺激物
刺激時(shí)間
蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑
表面標(biāo)志蛋白
IL-2
JES6-5H4
Splenocytes
PMA (20 ng/ml)
plus ionomycin (1μg/ml)
4-6 h
monensin or
brefeldin A
CD3
IL-3
MP2-8F8
Purified CD4+ T
cells stimulated with immobilized **-CD3 (10 μg/ml) + soluble **-CD28 (2
μg/ml) + IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 2 days, wash and then culture
in IL-2 + IL-4 for 3-4 days
PMA (20
ng/ml)plusionomycin (1μg/ml)
4-6 h
monensin or
brefeldin A
CD4
GM-CSF
MP1-22E9
Splenocytes
stimulated with immobilized **-CD3 (10 μg/ml) + soluble **-CD28 (2 μg/ml) for
2 days, wash and then culture in IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 3-4
day
PMA (20 ng/ml)
plus ionomycin (1 μg/ml)
4-6 h
monensin or
brefeldin A
CD3
IFN-γ
XMG1.2
Splenocytes
PMA (20 ng/ml)
plus ionomycin (1 μg/ml)
4-6 h
monensin or
brefeldin A
CD3
相關(guān)產(chǎn)品：
|
貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
價(jià)格/元 |
|
WU047 |
Monensin Solution (1,000×) 莫能霉素溶液（1,000×） |
1ml |
98 |
|
WU077 |
Monensin, Sodium Salt 莫能霉素（鈉鹽） |
100mg |
460 |
|
WU060 |
Ionomycin, Free Base 離子霉素（游離酸） |
1mg |
535 |
|
WU070 |
Ionomycin, Free Base 離子霉素（游離酸） |
5mg |
1720 |
|
WU072 |
Ionomycin, Calcium Salt 離子霉素（鈣鹽） |
1mg |
535 |
|
WU074 |
Ionomycin, Calcium Salt 離子霉素（鈣鹽） |
5mg |
1720 |
|
WU045 |
Brefeldin A (BFA, 5mg/ml) 布雷非德菌素A（5mg/ml） |
200μl |
410 |
|
WU065 |
Brefeldin A (BFA, 5mg/ml) 布雷非德菌素A（5mg/ml） |
1ml |
1500 |
|
WU085 |
Brefeldin A (BFA, Powder) 布雷非德菌素A（粉末） |
5mg |
1200 |
|
WU061 |
PMA (TPA, 5mg/ml) 佛波肉荳蔻醋酸（5mg/ml） |
200μl |
445 |
|
WU062 |
PMA (TPA, Powder) 佛波肉荳蔻醋酸（粉末，超純） |
5mg |
1780 |
|
WU055 |
Calcium Ionophore A23187鈣離子載體 |
1mg |
320 |
保存與運(yùn)輸方法
保存:-20°C避光保存2年有效。運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。