RPA（重組酶聚合酶擴增）技術(shù)原理

英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴增，開發(fā)的重組酶聚合酶擴增專利技術(shù)(RPA),被譽為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。(http://www.twistdx.co.uk) 

What is RPA?

概念：重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應溫度在37°C左右。

RPA技術(shù)原理：

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？?，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

Who uses RPA?

以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進行常溫下的單分子核酸檢測該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

TwistAmp? Basic 試劑盒可實現(xiàn) DNA 擴增。包含 DNA 擴增所需的所有酶和試劑，用戶只需提供引物和模板。使用 TwistAmp? Basic 時，即使 PCR 引物也有效。TwistAmp? Basic 已被用于固相、加尾引物、配基、電化學和微陣列等應用。

非常適用于：終點凝膠電泳 DNA 檢測、下游應用（例如亞克隆）

TwistAmp? exo 試劑盒可實現(xiàn)實時熒光 DNA 擴增。若想要以均相形式將 TwistDx RPA 擴增技術(shù)與 TwistDx 專利熒光 TwistAmp? exo 探針結(jié)合使用，則推薦使用本產(chǎn)品。用戶只需提供引物、探針和模板。更多信息請參閱手冊。

非常適用于：實時熒光 DNA 檢測

TwistAmp? nfo 試劑盒可實現(xiàn)橫向流動檢測用 DNA 擴增。若想要通過終點夾心法（例如橫向流動 [LF] 試紙條）檢測有效 DNA 擴增反應的產(chǎn)物，則適合使用本產(chǎn)品。用戶只需提供引物、探針和模板。

非常適用于：開發(fā)低成本的現(xiàn)場側(cè)向?qū)游鰴z測方法。

包含凍干試劑的 TwistAmp? 試劑盒具有以下優(yōu)勢：

RPA 擴增溫度要求低，允許使用低成本、便于攜帶的檢驗設(shè)備。

干 RPA 試劑足夠穩(wěn)定，可以在室溫下運輸。

允許多種「適宜現(xiàn)場的」檢測輸出技術(shù)，例如側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)和熒光技術(shù)。

RPA 對一些復雜樣本類型表現(xiàn)出高度穩(wěn)健性（即樣本耐受性），更適合于許多不同的現(xiàn)場實地應用。

除了在現(xiàn)場實地使用中的優(yōu)勢，通過 TwistAmp? 試劑盒還便于為許多應用和用途開發(fā)出快速、特異且靈敏的 DNA 和 RNA 檢測方法。

TwistAmp? Liquid 是為了提供散裝液體形態(tài)的核心 RPA 組分，最終用戶能夠以不同的比例混合這些組分，以便用戶為各自的應用配制預混液*。

TwistAmp? Liquid 具有以下優(yōu)勢：

最終用戶可自由調(diào)整預混液制備量，而不再被局限于凍干試劑的固定體積

最終用戶可自由調(diào)整反應體系中的組分比例，這使 RPA 試驗開發(fā)工作具有更大的靈活性

TwistAmp? Liquid Basic 是一款最適合用于凝膠分析或者作固相、加尾引物、適配體、電化學和微陣列應用的 DNA 擴增試劑盒。TwistAmp? Liquid exo 是一款用于以實時熒光檢測擴增反應的 DNA 擴增試劑盒。

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