新冠疫情尚未褪去，猴痘病毒又接踵而至。隨著不同應(yīng)用場(chǎng)景病毒檢測(cè)的需要，CRISPR分子診斷技術(shù)因其可與PCR、LAMP及RPA/RAA等多種核酸擴(kuò)增手段高效對(duì)接，并具有病原物快速、準(zhǔn)確鑒定的優(yōu)勢(shì)，在傳染病的即時(shí)檢測(cè)技術(shù)中迅速崛起，并成為科研及IVD行業(yè)中蓬勃發(fā)展的方向之一。

       目前市場(chǎng)上廣泛商業(yè)化的CRISPR核酸檢測(cè)試紙條僅能顯示單一報(bào)告分子的切割產(chǎn)物，因此雖然科研領(lǐng)域已經(jīng)形成大量重磅級(jí)別的研究成果，但仍然難以滿足IVD行業(yè)對(duì)同一樣品雙靶標(biāo)陽性的檢測(cè)需求，因而未能得到廣泛應(yīng)用。

       Tiosbio聚焦體外診斷核酸檢測(cè)試紙條產(chǎn)品的“科技創(chuàng)新+先進(jìn)制造”，重磅推出了兩款基于CRISPR Cas的雙靶標(biāo)核酸檢測(cè)試紙條新品：

1. 擴(kuò)增產(chǎn)物及Cas酶切產(chǎn)物檢測(cè)試紙條（JY0307）

       JY0307適用于IVD病原物快檢試劑盒。內(nèi)參基因的質(zhì)控通過雙鏈擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)線T2顯示，監(jiān)控檢測(cè)流程中核酸釋放、擴(kuò)增步驟是否正常工作；CRISPR信號(hào)探針切割產(chǎn)物的檢測(cè)線T1對(duì)標(biāo)靶基因的信號(hào)放大過程，確保了靶基因高特異性和高靈敏度的檢測(cè)。

當(dāng)CRISPR信號(hào)探針（檢測(cè)線T1）、雙鏈擴(kuò)增產(chǎn)物（檢測(cè)線T2）做如下修飾時(shí)，即可使用JY0307進(jìn)行檢測(cè)——CRISPR信號(hào)探針的一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）；擴(kuò)增產(chǎn)物一端修飾有地高辛（Dig），另一端修飾有羅丹明（TAMRA）。

       JY0307不同檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色結(jié)果含義如下圖所示。

2. Cas12/Cas13雙酶切產(chǎn)物檢測(cè)試紙條（JY0308）

       JY0308適用于雙鏈產(chǎn)物在同一體系進(jìn)行Cas12和Cas13雙酶切后的產(chǎn)物檢測(cè)。當(dāng)靶基因經(jīng)PCR、LAMP、RPA/RAA擴(kuò)增后，在同一體系內(nèi)，使用Cas12和Cas13酶同時(shí)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行切割，Cas12酶對(duì)應(yīng)的DNA信號(hào)探針A（Cas12切割），與Cas13酶對(duì)應(yīng)的RNA信號(hào)探針B（Cas13切割）進(jìn)行如下修飾，即可使用JY0308進(jìn)行切割產(chǎn)物的檢測(cè)——其中，DNA信號(hào)探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM），RNA信號(hào)探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig）；或DNA信號(hào)探針A一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有地高辛（Dig），RNA信號(hào)探針B一端修飾有生物素（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）。

       JY0308的特別之處在于，該產(chǎn)品為變色雙矯正顯色試紙條。當(dāng)DNA信號(hào)探針A和RNA信號(hào)探針B均發(fā)生酶切反應(yīng)，但酶切反應(yīng)不完全的情況下，質(zhì)控線C、檢測(cè)線T1和檢測(cè)線T2均會(huì)顯色，其中質(zhì)控線C為紫色，檢測(cè)線T1為紅色，檢測(cè)線T2為藍(lán)色；當(dāng)DNA信號(hào)探針A和RNA信號(hào)探針B完全酶切的情況下，只有檢測(cè)線T1和檢測(cè)線T2顯色，其中T1為紅色，T2為藍(lán)色。在探針A和探針B等摩爾濃度混合，且終濃度≤500nM時(shí)，帶有FAM標(biāo)記的探針發(fā)生酶切反應(yīng)，而帶有Dig標(biāo)記的探針未被酶切時(shí)，僅有檢測(cè)線T1為紅色，質(zhì)控線C為藍(lán)色；帶有Dig標(biāo)記的探針發(fā)生酶切反應(yīng)，而帶有FAM標(biāo)記的探針未被酶切時(shí)，僅有檢測(cè)線T2為藍(lán)色，質(zhì)控線C為紅色，從而達(dá)到互相矯正的目的。

       JY0308不同檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色結(jié)果含義如下圖所示。